Определение аминолевулиновой кислоты в моче.
Принцип метода заключается в отделении мешающих веществ (порфобилиноген и др.) от аминолевулиновой кислоты, сорбировании их на активированном угле и последующем определении аминолевулиновой кислоты по реакции образования пиррола с ацетилацетоном при нагревании. Конечный этап методики состоит в спектрофотометрировании окрашенного продукта реакции пиррола с реактивом Эрлиха [Семенова Л.С. и др., 1988].
Реактивы:
- Ледяная уксусная кислота
- Ацетилацетон
- 57 % раствор хлорной кислоты + Активированный уголь
- Ацетатный раствор, рН 3,6
- Реактив Эрлиха: 5,0 г парадиметиламинобензальдегида, 175 мл ледяной уксусной кислоты, 40 мл хлорной кислоты. Довести до 250 мл уксусной кислотой.
Методика определения аминолевулиновой кислоты в моче
К 1 мл мочи добавляют 9 мл взвеси активированного угля в ацетатном буферном растворе (0,25 г угля в 100 мл буфера). Суспензию встряхивают 1 мин, отфильтровывают через бумажный фильтр. В две пробирки отбирают по 2 мл фильтрата (контроль и опыт). В опытную пробирку добавляют 0,05 мл ацетилацетона и перемешивают. Затем обе пробирки (закрытые пробками) помещают на 20 мин в кипящую водяную баню. После охлаждения и доведения ацетатным буфером объема до 2 мл добавляют по 2 мл реактива Эрлиха и перемешивают. Через 15 мин для определения аминолевулиновой кислоты в моче пробу фотометрируют.
Сообщения
